槐定碱对急性心肌缺血大鼠血清MDA、SOD、GSH-PX及NO的影响

【摘要】  目的 研究槐定碱对急性心肌缺血大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及NO的影响。方法 将SD大鼠随机分为8组，每组8只，分别为正常对照组、假手术组、模型组、丹参组、硝酸甘油组、槐定碱2.5、5和10mg/kg剂量组。结扎左冠状动脉前降支(LAD)制备大鼠急性心肌缺血模型，采用比色法检测静脉注射槐定碱各组血清中MDA、NO含量和SOD、GSH-PX活性。结果 与模型组相比，槐定碱2.5、5、10mg/kg组可降低急性心肌缺血大鼠血清MDA含量、升高SOD活性和NO含量(P<0.05或P< 0.01)。槐定碱5、10mg/kg组能升高GSH-PX活性 (P<0.05或P<0.01)。结论 槐定碱对急性心肌缺血损伤保护作用的机制可能与其清除氧自由基和抗脂质过氧化作用有关。

【关键词】  槐定碱;急性心肌缺血;氧自由基文学论文发表

             槐定碱(Sophoridine，SR)是从豆科槐属植物苦豆子中分离提纯出来的一种生物碱。近年来发现槐定碱在减慢心率[1]、抗心律失常、抗病毒、抗炎、抗菌[2-3]、增强免疫及抗肿瘤等[4]方面有重要的药理活性和应用前途。本研究采用化学比色法检测大鼠急性心肌缺血时血清中丙二醛(MDA)含量、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及一氧化氮(NO)含量，以探讨槐定碱对大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用及机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　雄性健康SD大鼠250～300g，由宁夏医科大学实验动物中心提供。 BL-420生物机能实验系统(成都泰盟)，DH-140动物人工呼吸机(浙江)，721型分光光度计(上海)，槐定碱(纯度96%)，宁夏紫金花药业股份有限公司盐池药厂提供，批号021180;丹参滴注液(安徽华源生物药业，批号05112501);硝酸甘油注射液(山西康宝生物制品股份有限公司，批号060501);氨基甲酸乙脂(上海化学试剂公司，批号20041023)。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，分别为MDA试剂盒(批号20060121)、SOD试剂盒(批号20060214)、GSH-PX试剂盒(批号20060217)、NO试剂盒(批号20060213)。

　　1.2 实验方法

　　将SD大鼠随机分为8组，每组8只，分别为正常对照组(给予等容量NS)、假手术组、模型组、丹参组(125mg/kg)、硝酸甘油组(0.3mg/kg)、槐定碱2.5、5和10mg/kg剂量组。采用股静脉注射药物，20 min后结扎左冠状动脉前降支 (LAD)制备大鼠急性心肌缺血模型，假手术组LAD下只穿线不结扎。心肌缺血模型建立成功的标准：①肉眼观察：心前区颜色变暗;②心电图的改变：标准肢体Ⅱ导联ST段抬高;③血流动力学指标的改变：心率减慢，动脉血压下降，心脏收缩和舒张功能降低;④组织学改变：电镜下可见线粒体损伤等心肌缺血的表现。缺血3h后静脉采血，静置30min后，离心(3000r/min,10min)取血清，分装后置于-70℃冰箱保存。用比色法测定血清MDA含量、SOD活性、GSH-PX活性及NO含量。

　　1.3 统计学方法

　　实验数据以均数±标准差(±s)表示，用SPSS 11.5软件进行统计学处理。多组间比较采用One-Way ANOVA分析，两组间比较采用独立样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　模型组大鼠血清中MDA含量明显升高，SOD、GSH-PX活性和NO含量明显降低(P<0.01)。与模型组相比，槐定碱 2.5、5、10mg/kg各组均能降低血清MDA含量，升高血清SOD、GSH-PX活性和NO含量(P<0.05或P<0.01);槐定碱 10mg/kg组与两组对照药物相比对大鼠急性心肌缺血时血清MDA含量、SOD、GSH-PX活性及NO含量的影响差异无统计学意义。因此，槐定碱能降低大鼠急性心肌缺血时血清MDA含量，升高血清SOD、GSH-PX活性和NO含量。结果见表1。表1 槐定碱对急性心肌缺血大鼠血清MDA、SOD、GSH-PX及NO的影响

　　3 讨论

　　近年来，随着心肌缺血损伤机制研究的不断深入，发现大量的氧自由基生成及脂质过氧化反应增强是心肌缺血损伤的主要机制之一[5]。氧自由基[即所谓活性氧:O-2(超氧化物阴离子自由基)、·OH(羟自由基)、过氧化氢等]是心肌细胞的正常代谢产物，可对机体产生损伤。但正常心肌组织含有抗氧化防御系统：SOD、CAT(过氧化氢酶)、GSH-PX、POD(过氧化酶)及VitC、E和硒等，可以清除或协助清除氧自由基，以保持氧自由基的生成和清除的动态平衡，使心肌细胞免受活性氧损害和维持正常生理功能。在各种疾病引发的心肌缺血过程中，机体内氧自由基的生成明显增多，而对氧自由基的清除能力急剧下降，从而造成心肌组织中氧自由基的大量蓄积。氧自由基对心肌细胞的损伤机制是多方面的，主要包括对心肌细胞膜、DNA及线粒体的损伤。氧自由基能诱导心律失常、诱导细胞凋亡、激活转录因子、诱导基因表达等[6]。
　氧自由基与不饱和脂肪酸反应形成过氧化脂质，过氧化脂质进一步分解成MDA。MDA是脂质过氧化产物的典型代表，它不仅反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度，而且还影响了膜离子转运机制，导致膜对Ca2+的通透性增高，能继发性地引起细胞内钙超载，而胞内钙失衡是造成细胞坏死或凋亡的重要机制之一。因此通过降低脂质代谢产物MDA水平，可以直接或间接地减轻细胞的凋亡坏死。SOD是机体清除氧自由基的重要酶类，对机体的氧化和抗氧化平衡起到至关重要的作用。所以，通过提高SOD的活性，可以减轻细胞的的氧化损伤[7]。

　　GSH-PX是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶。它特异地催化还原型谷胱甘肽(GSH)对H2O2的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能完整性的作用。GSH-PX与SOD等酶共同组成一个氧化有机氢过氧化物酶系，主要负责清除H2O2。这些酶能协同地防止活性氧损伤细胞膜，并且彼此之间相互保护。如这一系统中某一种酶活性下降或缺失，则会引起细胞受损或不可逆性损伤。

　　NO是一种由一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸生成的难溶于水的非极性气体(L-精氨酸+NADPH+O2→瓜氨酸+NO+NADP+)，因为它的分子结构中具有不配对电子，所以也属于自由基。由于NO具有脂溶性，能通过生物膜快速扩散，因而在细胞间较广泛地起作用。文学论文发表

　　综上所述，本实验模型组大鼠血清中MDA含量明显升高，SOD、GSH-PX活性和NO含量明显降低(P<0.01)，表明急性心肌缺血可产生氧自由基引起心肌损伤。实验结果表明，槐定碱能提高心肌缺血大鼠血清SOD、GSH-PX活性及NO含量，增强了内源性氧自由基清除系统的功能，显著减少血清脂质过氧化产物MDA的水平，减轻了氧自由基对心肌的损伤。各组虽然与假手术组比较各指标有所升高或降低，但与模型组比均有改善。提示槐定碱具有清除自由基和抗脂质过氧化作用，这可能是槐定碱保护缺血时心肌细胞损伤的机制之一。

【参考文献】
  [1] 张红梅，闫琳，李汉青. 槐定碱和氧化槐定碱对豚鼠心率的影响[J]. 宁夏医学院学报, 1998, 20(4): 4-5.

　　[2] 黄秀梅,李波.六种苦豆子生物碱对炎症介质的白三稀的影响[J]. 中成药，2003，25(10):824-826.

　　[3] 杨志伟,周娅,曹秀琴. 苦豆子生物碱体外抗柯萨奇病毒的作用[J].四川中医,2003,21(3): 14-16.

　　[4] 周炳刚,苏刚,马德强. 槐定碱诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的实验研究[J].肿瘤,2003,23(3):197-199.

　　[5] 邢启崇. 心血管病实验诊断学[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2004： 40-41.

　　[6] 周玖瑶，李锐，廖雪珍，等. 环维黄杨星D抗垂体后叶素致心肌缺血作用机理研究[J]. 广州中医药大学学报, 2005, 22(6): 454-457.

　　[7] 孙平龙，尚云，卫新国，等. 黄芪保心汤对实验性心肌缺血大鼠心肌组织MDA、SOD水平及心肌组织形态学的影响[J]. 上海中医药大学学报, 2000, 14(2): 38-40.