维生素E抑制3T3L1前脂肪细胞的分化
【摘要】 目的：研究维生素E对3T3L1前脂肪细胞增殖和分化的影响。方法：利用MTT研究维生素E对3T3L1前脂肪细胞增殖的影响，利用油红O染色法测定维生素E对3T3L1前脂肪细胞分化的影响。结果：维生素E对3T3L1前脂肪细胞增殖无影响，10 ～100μmol/L维生素E能抑制3T3L1前脂肪细胞的分化。结论：维生素E对前脂肪细胞分化具有抑制作用。
【关键词】 维生素E；碘；3T3L1；增殖；分化；肥胖；MTT；油红O染色法
［ABSTRACT］ Objective: To study the effects of vitamin E on proliferation and differentiation of 3T3L1 preadipocyte. Methods: The effect of vitamin E on the proliferation of 3T3L1 was determined by MTT. Oil red O staining was used to determine the differentiation rate and level of 3T3L1 preadipocytes. Results: Vitamin E inhibited the differentiation of preadipocytes at 10 μmol/L and 100 μmol/L. Conclusions: Vitamin E could inhibit the differentiation of 3T3L1 preadipocyte.
［KEY WORDS］ Vitamin E; Iodine; 3T3L1; Proliferation; Differentiation; Obesity; MTT; Oil red staining
维生素E除了具有抑制多元不饱和脂肪酸及磷脂质被氧化，保护细胞膜的抗氧化作用外，还具有许多非抗氧化的功能。我们以往的实验中发现维生素E对营养性肥胖小鼠具有降低体重的作用［1，2］，为了进一步研究其作用机制，本实验利用3T3L1前脂肪细胞研究维生素E对前脂肪细胞增殖和分化的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
DMEM培养基和HEPES购于Gibco公司，胎牛血清购于杭州四季青公司，1甲基3异丁基黄嘌呤（1methyl3isobuthylxanthine，IBMX）、地塞米松（dexamethasone，DEX）、胰岛素（insulin）、 油红O（Oil red）、噻唑蓝（MTT）、维生素E均购于Sigma 公司。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养 3T3L1前脂肪细胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基，在5%CO2、37℃培养箱中生长，根据细胞状况每2天换一次培养液。3T3L1前脂肪细胞融合达70%时，胰蛋白酶消化、传代。
1.2.2 细胞增殖实验 将3T3L1前脂肪细胞以5×103的密度接种于96孔
板，分为4组，培养基中维生素E终浓度分别为0、1、10和100μmol/L（对照组及1、10、100μmol/L维生素E组），每组6孔。培养72h后用MTT比色法以波长490nm测定各孔吸光度（OD）值。
1.2.3 细胞分化实验 实教育论文发表期刊
评职称论文发表网站 验分为对照组及1、10、100μmol/L维生素E组，每组6孔。配制诱导培养液为DMEM培养基＋0.5mmol/L的IBMX＋1.0μmol/L DEX+5mg/L的胰岛素，配制分化培养液为DMEM培养基＋0.5mmol/L的IBMX＋1.0μmol/L DEX。4组诱导和分化培养液中的维生素E终浓度分别为0、1、10、100μmol/L。将3T3L1前脂肪细胞5×103的密度接种于96孔板。细胞完全融合后2d（此时为诱导分化的第0天），换为诱导培养液，在第48小时（第2天）后换为分化培养液，第4天及以后的换液不加任何诱导分化剂，第8天细胞用10%的甲醛固定1h后，用油红O工作液（2mg/mL）染色2h，弃去油红O，用双蒸水充分洗干净，培养板放入37℃温箱使残余水分蒸发掉，用异丙醇溶解细胞内的油红O，在510nm波长测吸光度。
1.3 统计学处理
数据用±s表示，采用SPSS12.0统计软件进行单因素方差分析，与对照组比较采用Dunnett t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 维生素E对3T3L1前脂肪细胞增殖的影响
1、10、100μmol/L维生素E组OD490与对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05），见表1。
表1 维生素E对3T3L1前脂肪细胞增殖的影响（±s）
组别nOD490
对照组60.696±0.058
1μmol/L维生素E组60.668±0.067*
10μmol/L维生素E组60.689±0.031*
100μmol/L维生素E组60.630±0.095*
注：与对照组相比，*P<0.05。
2.2 维生素E对3T3L1前脂肪细胞分化的影响
1μmol/L维生素E对前脂肪细胞分化没有影响，而在10～100μmol/L 时可抑制前脂肪细胞的分化（图1、2，表2）。10μmol/L组、100μmol/L组细胞脂肪含量分别为对照组的57%、34%。
图1 维生素E对3T3L1前脂肪细胞分化的影响
注：A为对照组维生素E前脂肪细胞油红O染色；B为10 μmol/L组维生素E前脂肪细胞油红O染色；C为100 μmol/L组维生素E前脂肪细胞油红O染色
图2 维生素E对3T3L1前脂肪细胞分化的影响（×300）
表2 维生素E对3T3L1前脂肪细胞分化的影响（±s）
组别nOD510
对照组60.452±0.011
1μmol/L维生素E组60.413±0.010
10μmol/L维生素E组60.259±0.081*
100μmol/L维生素E组60.153±0.016*
注：与对照组相比，*P<0.05。
3 讨论
当前，肥胖症已经成为严重的社会问题，但是肥胖症的发病机制仍不明确。目前认为，在细胞水平上，肥胖症是由脂肪细胞增殖所引起的数目增多和/或分化所引起的体积增大所致。
3T3L1前脂肪细胞是从小鼠Swiss 3T3纤维母细胞克隆出来的，在诱导剂（包括insulin、IBMX和DEX）作用下，能分化为成熟的脂肪细胞［3］，是目前常用的研究脂肪细胞增殖和分化的细胞模型。
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