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TNFα、CD54在肝纤维化家兔肝移植中的表达及意义

作者:时间:2011-03-03 10:13:23 来源:www.ksfbw.com 阅读次数:912次 ]

【摘要】目的　　探讨肿瘤坏死因子-α（TNFα）、细胞间粘附分子-1（CD54）在肝纤维化家兔肝移植中的表达及意义。方法　　普通成年家兔30只，随机分为正常组5只，供体组10只，对照组5只，实验组10只。实验组应用四氯化碳（CCl4）法建立肝纤维化动物模型。然后，正常组给予假手术，对照组和实验组采用原位肝移植手术。术后24h处死所有实验动物，应用免疫组织化学的方法，检测各组肝脏组织中TNFα、CD54的表达。结果　　实验组TNFα、CD54的表达均比对照组和正常组明显增加（P<0.05）；对照组CD54表达比正常组增加（P<0.05）；对照组TNFα的表达与正常组无明显差异（P＞0.05）。结论　　TNFα、CD54在肝纤维化家兔肝移植中发挥重要作用，可能影响移植肝脏的损伤修复。

【关键词】肝移植肝纤维化 TNFα CD54职称论文发表网

［Abstract］　　Objective　　To study of the expression and its significance of TNFα and CD54 on liver tissue from liver transplantation rabbit with hepatic fibrosis.Methods　　Thirty adult rabbits were divided randomly into four groups,five rabbits were in ten normal group （NG）,ten in the donator,five in the control group （CG）,and ten in the experimental group （EG）.Carbon tetrachloride was injected intraperitoneally to make the hepatic fibrosis model of the rabbit in EG.Then NG was given sham operation,CG and EG were given liver transplantation operation.After operation 24 hours,all of the rabbits were executed,and immunohistochemistry staining was adopted to observe the positive expression of TNFα and CD54 molecular in liver tissue.Results　　The positive expression of TNFα and CD54 molecular in EG were significantly higher than that in NG and CG（P＜0.05）,and the positive expression of CD54 molecular in CG was higher than that in NG （P＜0.05）,but the expression of TNFα in CG was similar as in NG （P＞0.05）.Conclusion　　The positive expression of TNFα and CD54 on liver tissue from liver transplantation rabbit with hepatic fibrosis has important effect,which possibly impacts the reparation of transplanted liver.

［Key words］　　liver transplantation;h职称论文发表网 epatic fibrosis;TNFα;CD54

　　　　肝移植已成为治疗终末期肝病的唯一有效手段，但相对于其他外科手术来说，其风险仍然很大。排斥反应及原发性移植肝无功能已成为肝移植手术失败的主要原因。目前，国内外的研究方向主要是肝移植后的缺血再灌注损伤及移植排斥反应。本实验通过建立肝纤维化家兔模型，再施行肝移植，探讨肝纤维化家兔血液中的细胞因子对移植肝脏的作用。

1　　材料与方法

1.1　　实验动物及分组　　选取6月龄普通级雄性家兔30只，由青岛市药检所提供，体重1.75～2.25kg。随机分为正常组5只，供体组10只，对照组5只，实验组10只。正常组给予假手术，对照组和实验组采用原位肝移植手术。在不锈钢丝笼中饲养，早晚喂颗粒状饲料（青岛市药检所提供），中午喂青菜，自由饮用自来水。空气湿度为50％～70％，温度为20～29℃。职称论文发表网

1.2　　肝纤维化动物模型的建立［1］　　家兔饲养5天后开始造模。将四氯化碳（上海建信化工有限公司试剂厂）溶于菜籽色拉油中摇匀，使浓度为5％。高压消毒。取四氯化碳按0.1ml/kg行腹腔注射。开始每周一次行腹腔注射；4周后，根据动物的情况每周注射2次，四氯化碳剂量为0.14～0.26ml/kg，浓度为7％～13％。8周后行肝移植手术。

1.3　　肝移植动物模型的建立　　术前2h禁食，戊巴比妥钠30mg/kg耳缘静脉麻醉后，自腹正中切开腹腔，充分游离并显露左肾动、静脉。将两根长12 cm、内径3mm且充满肝素盐水的硅胶管分别由左肾动、静脉插入腹主动脉及下腔静脉内，钳夹游离端，备用。将待灌注的供肝门静脉及肝下下腔静脉依次与相应受体兔的肾动、静脉插管连接（此前结扎供肝的肝动脉及肝上下腔静脉），解除插管钳夹，恢复供肝血流［2］。供体组兔肝脏（供肝）的原位灌注及切取按Jamieson等［3］介绍的方法进行。假手术仅做肝脏及周围血管的游离。

1.4　　标本取材及染色　　职称论文发表网 24h后采用空气栓塞处死动物，切取左外叶肝组织标本。于40g／L多聚甲醛固定液中固定6h。固定后的组织常规浸蜡包埋、连续切片。应用免疫组织化学SABC三步法染色，检测TNFα、CD54在各组肝脏组织中的表达，DAB显色，镜下控制显色时间。最后脱水，透明，封片，显微镜观察。

1.5　　免疫组化测定　　免疫组化染色结果利用美国Sample PCI图像分析系统进行平均吸光度测定，将免疫组化染色结果转化为平均吸光度值进行定量分析。每张切片以组织间质空白处入射光的值为定标。每张切片测定5个视野吸光度取平均值，以其作为切片的测定值。切片阳性表达的强弱与吸光度值呈正相关。TNFα、CD54均表达在染色阳性细胞的胞浆或胞膜呈现程度不同、基本均匀的棕黄色颗粒。

1.6　　统计学处理　　所有数据均用SPSS 13.0进行统计学分析。取α=0.05为检验水准，P<0.05表示差异有显著性。

2　　结果职称论文发表网

2.1　　病理改变　　大体见正常组家兔肝脏呈鲜红色，有光泽，质地柔软；实验组动物肝脏呈灰白色，无光泽，被膜肿胀,且质地变硬。HE染色可见光镜下正常组肝细胞呈条索状排列，形态无明显改变；对照组肝细胞轻度肿胀，部分细胞呈气球样变，主要

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