力竭运动后不同时相大鼠心肌肌钙蛋白-T的变化

【摘要】  目的：探讨力竭运动后大鼠心肌肌钙蛋白-T（cTnT）分布及含量的变化。方法：将50只健康成年雄性SD大鼠随机分为一次力竭运动组和安静对照组，运动组采用游泳运动方式分别于力竭运动后即刻、6 h、12 h、24 h取材，应用免疫荧光技术和图像分析方法对大鼠心肌肌钙蛋白-T分布及含量的改变进行研究。结果：力竭运动后各时相大鼠心肌cTnT分布变得紊乱，在心肌细胞间及细胞内的分布不均一；一次力竭后即刻、6 h和12 h右心室cTnT含量高于对照组（P＜0.01）。结论：一次力竭运动均可使心肌cTnT分布变得紊乱，这可能是导致心肌机械功能异常的原因之一。

【关键词】  力竭运动；心肌微损伤；肌钙蛋白T教师论文发表

    Abstract  Objective: To observe the changes in the distribution and the content of troponin T(cTnT) in myocardial tissue of cats after exhaustion exercise at different time points. Methods: Fifty Male Sprague-Dawley rats were randomly divided into sedentary control group and single bout of exhaustion exercise groups. Rats in the exhaustion exercise group were killed for the specimen of cTnT 0 h,6 h,12 h and 24 h after exhaustion exercise. Immunofluorescence technique and image-analysis were used to study the changes in distribution and content of cardiac troponin T(cTnT) in myocardial tissue of the rats. Results: After single bout of exhaustion exercise, myocardial cTnT distribution became disuniform, in which myocardial cTnT became increased, decreased or even vanished in different sections. Right ventricle myocardial cTnT content 0 h,6 h and 12 h after single bout of exhaustion exercise was remarkable higher than that in the control group (P<0.01). Conclusion: Single bout of exhaustion exercise may cause disorder and disuniformity in the distribution of myocardial cTnT,  which may be one of the reasons for myocardial mechanical malfunction.

    Key words  Exhausive exercise； Heart micro-injury； Cardiac troponin T

    研究发现，反复持续进行的大强度运动和急性力竭运动可对机体产生不利影响，常导致运动性疲劳与损伤的发生，尤其是运动性心肌微损伤[1-3]，可直接影响执行心肌特殊功能的蛋白质的表达异常，造成心肌功能的异常。心肌肌钙蛋白（cTn）是存在于心肌肌原纤维中细肌丝上的收缩调节蛋白，主要调节心肌收缩过程中粗、细肌丝之间的相对滑行。cTn分子呈球形，含3个亚单位，即cTnC、cTnI和cTnT。cTnT的作用是将整个肌钙蛋白分子结合于原肌凝蛋白。当心肌细胞受损时，cTn可从细胞中释放至血液循环中，现有方法可从外周血清中检测cTnT和cTnI。目前临床上把cTnT认为是确定心肌发生心肌缺血、缺氧最早的标志物。有学者采用大鼠的心肌缺血模型，利用免疫组化的方法测量缺血后不同时间段的cTnT改变情况，发现大鼠急性心肌缺血15 min cTnT即出现明显缺失，随着缺血时间的延长，cTnT的缺失面积逐步增大[4]，籍此认为cTnT对于早期心肌缺血损伤的病理学诊断是一个敏感的指标，同时也说明缺血、缺氧可以造成心肌cTnT的降解。肌钙蛋白作为介导肌丝滑动的结构物质对心肌正常机械功能的发挥有重要作用，肌钙蛋白的降解可能是造成心肌机械功能障碍的原因之一。关于力竭运动后cTnT改变的实验研究尚未见报道，本研究选择cTnT作为目标因子，旨在研究不同力竭运动后心肌cTnT的改变，为运动性心肌微损伤时心肌纤维病理改变和心肌机械功能异常发生机制的探讨提供实验依据。

    本研究制定了力竭游泳运动实验动物模型，观教育教学论文发表 察实验大鼠在力竭运动后即刻、6 h、12 h和24 h 4个时相点cTnT分布及含量的变化，试图为力竭运动后心肌机械功能异常的发生机制探讨提供实验依据。

　　1  材料与方法

　　1.1  实验动物和分组

　　健康雄性成年SD大鼠50只，体重（260±8 ） g。大鼠随机分为5组，每组10只，其中一次力竭游泳运动4个组，对照1个组，各组间大鼠初始体重差异无显著性（P＞0.05）。国家标准啮齿动物饲料喂养，自由饮食。饲养环境为室温（20±2) ℃，光照时间12 h，相对湿度40 %～55 %。

　　1.2  实验方法
 
　　1.2.1  力竭游泳运动

　　采用PVC特制泳池，规格为1.6 m×0.8 m×1.2 m，内壁光滑，水深约60 cm，超过大鼠身长2倍，控制水温在30～33 ℃。运动组大鼠进入动物房后首先适应3 d，然后进行2 d适应性游泳运动（20 min/次），每次运动后，迅速用干毛巾擦干大鼠体表水分，电吹风吹干后，放回笼中休息，第3 d尾部负重3 %体重的重物进行一次力竭运动，力竭标准参照Thomas的报道[5]。对照组笼中饲养，无运动干预。

　　1.2.2  大鼠心肌取材 文学论文发表

　　一次力竭运动组分别于运动后即刻、6 h、12 h、24 h取材，对照组正常饲养相应天数后与运动组同时取材。大鼠腹腔注射10 %水合氯醛（1 mL/100 g体重）麻醉后，开胸并迅速取出心脏，经灭菌生理盐水清洗后迅速垂直于心脏长轴切取心肌组织，滴加OCT包埋剂后置于液氮冷冻20 s后转入冰冻切片机恒温箱，切取7 μｍ厚的冰冻切片，置于-70 ℃超低温冰箱备用。

　　1.2.3  心肌冰冻切片的免疫荧光染色

　　cTnT在胞浆内表达，采用绿色荧光标记，具体步骤如下：（1）将-70 ℃超低温冰箱保存的冰冻切片取出，室温复温30 min后入4 ℃丙酮固定10 min，PBS漂洗5 min×3次；（2）10 %正常山羊血清封闭，室温孵育10 min；（3）弃去血清，勿洗，滴加1∶100稀释的小鼠抗大鼠cTnT（美国Lab Vision公司），4 ℃过夜，PBS漂洗5 min×3次；（4）滴加1∶100稀释的